A.E. Verna1, M.R. Leunda1, E.L. Louge Uriarte1, S.B. Pereyra1, M.S. Marín1, E. González Altamiranda1, S.E. Pérez2, A.C. Odeón1.
1 Laboratorio de Virología, Grupo de Sanidad Animal, INTA, CC 276 (7620), Balcarce.
2 CONICET, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNCPBA. odeon@balcarce.inta.gov.ar
Presentado en la XVII Reunión científico-técnica de la Asociación Argentina de Laboratorios de Diagnóstico Veterinario; 2008.
El Herpesvirus bovino tipo 4 (BoHV-4) pertenece a la Familia Herpesviridae, subfamilia herpesvirida género Rhadinovirus (Zimmerman et al., 2001). La infección por herpesvirus bovino tipo 4 ha sido diagnosticada en diferentes países de África, Estados Unidos y diferentes países Europeos. El aislamiento del virus se ha logrado tanto de ganado aparentemente sano, así como de aquellos que exhiben una variedad de enfermedades incluido el aborto, metritis, endometritis, vaginitis, enteritis e infecciones respiratorias. Frazier et al. (2002) reportó al BHV-4 asociado a endometritis como un síndrome emergente en vacas lecheras en el estados de Georgia, EE.UU. El rol patogénico del BoHV-4 aún no está esclarecido a pesar de su tropismo por las células del endometrio bovino (Donofrio et al., 2007), como también se desconoce qué condiciones son requeridas para la expresión de la enfermedad, que ha sido experimentalmente reproducida por sólo un número limitado de investigadores (Thiry et al. 1989). La replicación de la mayoría de los herpesvirus se limita a la especie hospedadora, en cambio el BoHV-4 es una excepción a esta regla, porque se ha demostrado que es capaz de replicarse en una amplia gama de especies huésped tanto in vivo como in vitro. En base al análisis de la estructura del genoma, el BoHV-4 ha sido recientemente clasificado como un gamma-herpesvirus, los resultados de las infecciones por gammaherpesvirus no sólo dependen del virus sino también del tipo de células infectadas. Una característica peculiar es el hecho de que no siempre puede replicar fácilmente en los cultivos celulares, lo que hace dificultoso su estudio. La infección pareciera estar basada en estadios de latencia evitando la respuesta inmune. Por otra parte, estos virus se adaptan a sus reservorios naturales causando infecciones asintomáticas. BoHV-4 ha sido recientemente aislado en Argentina (Verna et al., 2008). El presente trabajo describe el aislamiento del herpesvirus tipo 4 asociado a problemas reproductivos del ganado bovino.
Materiales y Métodos
Se realizaron análisis a partir de muestras de mucus cérvico-vaginal (MCV) enviadas al Servicio de Diagnóstico Especializado de INTA Balcarce para el diagnóstico de enfermedades infecciosas de la reproducción (EIR), provenientes de establecimientos ganaderos de diferentes partidos de la provincia de Bs As. Se realizaron aislamientos cultivos celulares y la prueba de PCR para BoHV-4 según el protocolo descripto por Egyed et al., 1996, el cuál fue modificado. La secuencia de los primers utilizados para la amplificación de la PCR fueron 5´-GTTGGGCGTCCTGTATG GTAGC-3´; 5´-ATGTATGCCCAAAACTTATAATATGACCAG-3”; 5´-TTGATAGTGCGTTGTTGGGATGTGGT-3´ y 5´-CACT GCCCGGTGGGAAATAGCA-3´.
Resultados
En el año 2007 se aisló el virus del MCV en dos casos donde la problemática planteada fue el aborto en vacas de rodeo de cría, algunas de ellas con mastitis y en vaquillonas inseminadas artificialmente. Durante el año 2008 se registraron 10 nuevos casos, presentando siempre la misma problemática. Si bien, el diagnóstico de rutina para las EIR en estos casos resultó negativo, se observó un ECP compatible con herpesvirus en el cultivo de las muestras en células MDBK. Todos los aislamientos fueron confirmados por un PCR nested modificando obteniéndose un producto final de 260 bp característico de BoHV-4.
Discusión
Estos resultados muestran la asociación de BoHV-4 en el desorden reproductivo de los bovinos, incluyendo el aborto. La falta de reactivos económicos para un diagnóstico rápido y sensible limita las posibilidades de detección en forma rutinaria, donde la eficiencia del diagnóstico de las EIR no supera el 45% (Campero et al., 2003). Por otra parte, el diagnóstico molecular por PCR demostró ser una herramienta de gran valor en la identificación y caracterización de un virus emergente. Analizando los casos remitidos se considera de relevancia estudios sobre la casuística de esta problemática a fin de conocer su posible impacto en la producción ganadera bovina.
Bibliografía
Frazier K.S., Baldwin C.A., Pence M., West J., Bernard J. Liggett A., Miller D., Hines M.E. 2002. Seroprevalence and comparison of isolates of endometriotropic bovine herpesvirus-4. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 14, 457–462.
Zimmerman W., Broll H., Ehlers B., Buhk H.-J., Rosenthal A., Goltz M. 2001. Genome sequence of bovine herpesvirus 4, a bovine Rhadinovirus, and identification of an origin of DNA replication. Journal of Virology 75, 1186–1194.
Donofrio G-, Herath S., Sartori C., Cavirani S., Filippo Flammini C., Sheldon L.M. 2007. Bovine herpesvirus 4 is tropic for bovine endometrial cells and modulates endocrine function. Reproduction 134, 183-197.
Egyed J., Ballagi-Pordany A., Bartha A., Belák S., 1996. Studies of in vivo distribution of bovine herpesvirus type 4 in the natural host. Journal of Clinical Microbiology 34, 1091–1095.
Thiry E., Bublot M., Dubuisson J., Pastoret P.P. 1989. Bovine herpesvirus-4 (BHV-4) infection in cattle. In: W.G. (Ed.), Herpesvirus diseases of cattle, horses and pigs. Kluwer, Boston, MA, pp. 96–115.
Campero C.M., Moore D.P., Odeón A.C., Cipolla A.L., Odriozola E. 2003. Aetiology of bovine abortion in Argentina. Vet. Res. Communications. 27:359-369.
Verna A.E., Leunda M.R., Louge Uriarte E.L, Lomónaco M., Pereyra S.B., Odeón A.C. 2008. Primera evidencia virológica de Herpesvirus bovino tipo 4 (BoHV-4) en Argentina. IX Congreso Argentino de Virología.