A. Verna 1,2, F. Hozbor4, R. Ramírez Vasquez2, E. González Altamiranda2, G. Cantón5, P. Morán3, S. Pereyra1, M. Leunda1, A. Odeón1, S.Pérez 2,3
1. Laboratorio de Virología, Departamento de Producción Animal, INTA, Balcarce, Buenos Aires.2. Consejo Nacional de InvestigacionesCientíficas y Técnicas (CONICET), Buenos Aires.3. CIVETAN, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNCPBA, Tandil, Buenos Aires.4.Laboratorio de Reproducción, Departamento de Producción Animal, INTA, Balcarce, Buenos Aires. 5. Laboratorio de Patología,Departamento de Producción Animal, INTA, Balcarce, Buenos Aires. seperez@vet.unicen.edu.ar
Introducción. El herpesvirus bovino 4 (BoHV-4) pertenece a la familia Herpesviridae, subfamilia Gammaherpesvirinae, género Rhadinovirus (Zimermann et al.,2001). Aunque el virus fue aislado de bovinos con diversos cuadros clínicos, ya sea como único agente o asociado a otros patógenos, también se lo aisló de animales clínicamente sanos; lo cual ha generado controversias sobre el verdadero rol del BoHV-4 como patógeno primario. En Argentina, BoHV-4 se aisló por primera vez en el año 2007, a partir de muestras de mucus cérvicovaginal de vacas que abortaron y que fueron remitidas al Servicio de Diagnóstico Veterinario Especializado (SDVE) del INTA Balcarce (Verna et al., 2008). Desde 2008 hasta la fecha, se cuenta con más de 50 aislamientos del virus, provenientes principalmente de muestras de secreciones vaginales de vacas con trastornos reproductivos, de ovocitos bovinos destinados a fecundación in vitro (Gonzáles Altamiranda et al., 2015) y de semen congelado de un centro de reproducción (Lomónaco et al., 2009, Morán et al., 2013), entre otras muestras. El análisis filogenético de cepas argentinas de BoHV-4 demostró que las mismas se distribuyen en grupos genéticamente distintos: Genotipo 1 (correspondiente al prototipo europeo), Genotipo 2 (prototipo americano) y Genotipo 3, un nuevo grupo sólo descripto en Argentina (Verna et al., 2012).
El objetivo de este estudio fue evaluar la patogenicidad de una cepa de BoHV-4 durante los estadios iniciales de la gestación en un modelo de infección experimental en el bovino.
Materiales y Métodos. Se utilizaron 6 hembras bovino adulto, libres de infecciones reproductivas cuyos ciclos estrales fueron hormonalmente sincronizados y recibieron servicio natural durante 24 hs. El monitoreo de la gestación se realizó semanalmente mediante ecografía. A los 30 días de gestación (diagnóstico ecográfico, Aloka SSD 500), 5 vacas fueron inoculadas vía intranasal con la cepa denominada 10/154 de BoHV-4 (genotipo 2) a una dosis de 10 ml a 106 TCID50/ml. Una hembra gestante, inoculada con medio de cultivo, se utilizó como control. Se colectaron muestras de sangre con anticoagulante para obtener leucocitos (buffy coats), hisopados nasales y oculares semanalmente post-inoculación. Los animales se sacrificaron en un matadero comercial a los 83 días postinoculación (dpi) (113 días de gestación), donde se obtuvieron muestras de tejido del tracto reproductivo, placenta y fetos. Las muestras se destinaron a aislamiento virológico y detección de ADN viral por nested-PCR para el ORF25 de BoHV-4 (Fabian y Egyed, 2004).
Resultados. Ninguno de los animales inoculados presentó signos clínicos y no se detectaron muerte embrionaria o abortos. No se logró aislar BoHV-4 de los hisopados nasales, oculares, o de muestras de tejidos maternos, placentas o fetos. Sólo fue posible el aislamiento de BoHV-4 de leucocitos circulantes de las vacas inoculadas a los 11 dpi. Mediante nested-PCR fue posible detectar consistentemente genoma de BoHV-4 de las muestras de útero y cérvix. Las muestras de ovario resultaron negativas. También fue posible detectar ADN de BoHV-4 en sistema nervioso, fluido de cavidad abdominal y pulmón de dos fetos recolectados de vacas inoculadas. Las muestras provenientes de la vaca sin inocular resultaron negativas.
Discusión. En el presente trabajo se demostró que la cepa de BoHV-4 utilizada en este estudio, representativa del grupo filogenético más frecuentemente detectado en nuestro país, es capaz de infectar los tejidos del tracto genital y del feto bovino. Aunque en este estudio no fue posible detectar BoHV-4 en los ovarios, estudios previos de Gonzáles Altamiranda et al. (2015) demostraron que el virus infecta las células de la granulosa de los ovocitos utilizados para fecundación in vitro. Si bien el rol patogénico de BoHV-4 en los trastornos reproductivos aún no está esclarecido, este trabajo aporta información relevante sobre la capacidad de infección y distribución del BoHV-4 en estos tejidos. Se requieren estudios adicionales para determinar la relación de BoHV-4 con el aborto bovino y sobre las consecuencias de la infección en estadios más avanzados de la gestación.
Bibliografía
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2. Verna AE, Leunda MR, Louge Uriarte EL, Lomónaco M, Pereyra SB, Odeón AC. 2008. First virologic evidence of Herpesvirus bovino tipo 4 (BoHV-4) en Argentina. Rev. Arg. Microbiol. 40(1):54-55.
3. Lomonaco, M., De Stefano, G., Legisa, D., Gonzalez, C., Leunda, M.R., Odeón, A., Verna, A. 2009. Finding of Bovine herpesvirus type 4 (BoHV-4) in bovine semen from reproduction center. XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología División de la Asociación Argentina de Microbiología. Córdoba, Prov. Buenos Aires.
4. Morán, P. Favier, M. Lomónaco, M. Catena, L. Chiapparrone, A. Odeón, A. Verna, 2013. Search for the genome of bovine herpesvirus types 1, 4 and 5 in bovine semen. Open Vet Journal. 3 (2), 126-130.
5. Verna AE; Manrique JM; Pérez SE; Leunda MR; Pereyra SB; Jones LR; Odeón AC. 2012. Genomic anuralalysis of bovine herpesvirus type 4 (BoHV-4) from Argentina: high genetic variability and novel phylogenetic groups. J Vet Microbiol. 9; 160(1-2):1-8.
6.González Altamiranda, E., Manrique, J., Ríos, G., Odeón, A., Leunda, M., Pérez, S., Jones, L., Verna, A.2015. Molecular characterization of the first bovine herpesvirus type 4 (BoHV-4) isolates from in vitro bovineproduced-embryos in Argentina. PlosOne. 10 (7):1-10.
7. Fabián K, Egyed L. 2004. Detection of bovine gammaherpesviruses by a nested duplex PCR.