La tecnología de PCR permite llevar a cabo trabajos con mayor precisión en el diagnóstico para avanzar en el tratamiento y/o la prevención de estas problemáticas tan frecuentes en los rodeos.
Por: Dr. Julio César Caione
juliocaione@lab9dejulio.com.ar
La búsqueda de la excelencia en el diagnóstico veterinario nos lleva a incorporar una nueva técnica de biología molecular: PCR Real Time, reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real.
Gracias a esta inversión, desde Laboratorio 9 de Julio podremos avanzar en la detección temprana de múltiples patologías de interés para el sector veterinario.
Esta nueva tecnología de PCR va a permitir llevar a cabo trabajos con mayor precisión en el diagnóstico para avanzar en el tratamiento y/o prevención. Sus principales características y ventajas son: sensibilidad, especificidad y rapidez de diagnóstico respecto a las metodologías habituales de aislamiento y cultivo.
¿Qué es la metodología de PCR?
La técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio que consiste en la generación de millones o miles de millones de copias de una región específica de ADN por la enzima Taq Polimerasa en un tiempo determinado.
Uno de los puntos principales para realizar esta técnica, es contar con la información de la secuencia específica de la cadena de ADN de interés.
Esta técnica es uno de los pilares de la biología Molecular, y fue desarrollada por el bioquímico Kary Mullis en 1985. Por este desarrollo recibió el Premio Nobel de Química en 1993. Hay diversos tipos de PCR, la versión Real Time permite observar en tiempo real la amplificación del ADN mediante la generación de curvas de amplificación, visualizadas con un software específico.
¿Cómo funciona?
Esta metodología se basa en la actividad de la enzima Taq Polimerasa, que tiene la capacidad de sintetizar ADN a partir de hebras simples de ADN (Gráfico Nº 1).
Para dicha síntesis es necesario que en la reacción estén presentes oligonucleótidos complementarios a la secuencia target (primer), dNTPs y Mg+2, el cofactor de la enzima.
Asimismo, es necesario que se repitan ciclos de temperatura que permiten la desnaturalización del ADN, apareamiento de los oligonucleótidos y síntesis.
En particular, el equipo de Real Time detecta en tiempo real la señal de fluorescencia emitida por la sonda TaqMan® (un oligonuclétido con fluorósforo en el extremo 5´, complementario a una secuencia corta específica del gen de interés) o por el fluorósforo SYBR® Green (es un intercalante de ADN, que se une inespecíficamente a los fragmentos amplificados). Se pueden ver ejemplos en el Gráfico Nº 2 que acompaña este artículo. Es decir que a medida que el ADN se amplifica, hay emisión de fluorescencia por la utilización de una sonda específica TaqMan que se une a la secuencia de interés o por el agente intercalante SYBR® Green. Los niveles de fluorescencia detectados son equivalentes a la cantidad de ADN amplificado.
¿Cuáles son sus aplicaciones?
Las mismas son múltiples: se aplica tanto para el campo de diagnóstico humano o animal, para identificar la presencia de un agente infeccioso (bacterias, virus, parásitos, etc.) o de una enfermedad hereditaria o mutación, entre otras aplicaciones. En una primera instancia, nuestro Laboratorio como lo ha hecho con las técnicas habituales desde sus orígenes, va a aplicar esta técnica para la detección de las enfermedades venéreas (Trichomoniasis y Campylobacteriosis), para posteriormente aplicar dicha tecnología al diagnóstico de las enfermedades virales, como son las del complejo respiratorio bovino, así mismo a leptospirosis, Carbunclo entre otras.
Para nuestro Laboratorio es una gran satisfacción y estamos muy orgullosos de contar con esta tecnología luego de 25 años de esmero en la búsqueda de una mejora para brindar el mejor servicio de diagnóstico.
Día a día hemos pensado en mejorar nuestros ensayos, como lo realizamos en su momento con la técnica de polarización fluorescente dejando atrás las pruebas tradicionales de Wright y 2-mercaptoetanol, incorporando además una amplia variedad de pruebas de ELISA para diferentes enfermedades como: IBR, BVD, Paratuberculosis, Neosporosis, Aujeszky porcino entre otras.
Como lo hemos hecho en nuestros inicios y lo estamos realizando actualmente, también vamos a seguir trabajando con la pasión que nos caracteriza para lograr un servicio de diagnóstico veterinario de excelencia como se lo merecen nuestros clientes y toda la ganadería argentina.
Gráfico Nº 1.
Adaptado de Andy Vierstraete 1999
Gráfico Nº 2.
Figura adaptada de TaqMan vs. SYBR Green. Retrieved April 22, 2013, de la página http://www.intechopen.com.